细胞培养室工作守则

发布时间:2022-08-15 阅读次数:

一、入室基本规则
1.禁止私自带非本实验平台人员入室操作。
2.进细胞培养室必须穿专用工作衣(白大衣),换拖鞋或鞋套,不必需的物品勿携入室内。
3.严禁吸烟和饮食,保持安静和良好秩序,实验时要严肃认真。
4.当天要操作的使用者,实验开始前、结束后开操作间外紫外灯消毒细胞房15-30min;检查培养箱内水量是否足够;检查灭菌物品的储备情况,以便及时补充。
5.细胞培养室遵循预约原则预约时间和实际操作时间都要登记!备查!无预约者若要在他人预约时段内使用,需先征得预约者的同意,否则应无条件让出工作台,以免耽误他人实验。
6.试剂耗材都由实验人员自己准备,各自物品请写好名字,不能私自拿取他人试剂耗材或消毒物品,如紧急需要,则需征得本人同意后方可。
注:公用材料如枪头、离心管,配制消毒用75%的酒精,制作酒精棉球等遵从谁消耗谁补充,与人方便于己方便!
耗材的使用秉持节约的原则,同一类耗材必须使用完才可以拆封新的耗材,同一类耗材快使用完的时候到徐老师处领取。
7.离开实验室前,脱去工作衣和拖鞋或鞋套。若有垃圾堆积,请顺手扔掉,更换垃圾袋。关好水、电、门、窗,方可离开实验室。
8.定期1-2月清理冰箱里的个人物品。
9.新进细胞培养室进行实验的老师或同学,由负责该新进人员的指导教师进行细胞培养培训。
 
二、培养箱使用规则
1.从培养箱取放物品前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。
注:培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染。
2.培养瓶皿放入培养箱前,用酒精消毒瓶口位置,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
3.2-3人共用一层培养箱,按预定位置摆放培养器皿,方便查找,以免长时间敞开培养箱。
4.普通培养中的细胞,若非实验需要,每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次,2人以上共用的细胞,可约好时间一起观察。注:频繁将细胞拿出观察,容易给培养箱造成污染,同时也会影响细胞生长条件的恒定。
5.培养箱贴上消毒、换水时间表,值日生请作好记录。
  
三、显微镜使用规则
1.显微镜使用前,用酒精棉球从中间至周围擦拭载物台,注意不要碰到镜头。
2.离开细胞房时或较长时间不需使用时,及时关上电源,延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。
 
四、超净台相关操作规则
1.检查酒精棉球是否足够;喷壶和酒精灯中酒精是否足够,液面应占容量1/3-2/3;不足请及时补充。 注:消毒用75%的酒精,酒精灯用95%的酒精,向喷壶或灯内添加酒精时请留意。
2.超净台中应摆放废液缸,用于暂时存放废弃物,实验结束后将20%的84消毒液倒入缸中浸泡约30分钟,冲洗晾干备用。废弃细胞需首先用20%的84消毒液消毒后再倒入下水道。
3.超净台使用前需用酒精棉球擦拭工作区消毒,打开紫外线灯和风机,同时打开室内紫外线灯照射30分钟以上;使用后需用酒精棉球擦拭工作区消毒,关闭风机,紫外线灯照射30分钟以上后关闭超净台电源。
    4.从外面拿进超净台的东西都要喷75%酒精消毒。
    5.可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等干净干燥后用放酸缸中浸泡过夜后,再进行洗涤。
洗涤程序:清水冲10次以上去除洗涤残留酸液,然后冲去离子水3次,再用双蒸水1次,倒置晾干。
6.每次实验结束后,应及时清理台面、桌面、地面,整理好用过的实验器材。观察培养箱中CO2的浓度、温度、水量、供气压力等参数,待正常后做好操作时间记录。将废弃物品带出操作间。
 
五、培养液、试剂等相关操作规则
1. 从冰箱取放物品动作要迅速,关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。
2. 买回的血清使用前需在超净台分装(15ml离心管),标注血清品牌、分装人和分装日期。分装好的血清长时间保存于 -20℃。如需使用,使用前放于4℃ 预解冻,在血清管上签上使用者名字及日期,解冻后的血清暂存在4℃并尽快使用。若使用别人解冻的血清需征得同意以免耽误他人实验。按需解冻,避免反复冻融。
3.细胞因子或蛋白等试剂到货后存放于-20度或-80度。若为粉状,在使用前按说明书溶解,并分装好,标注好试剂名称、分装日期,分装浓度,分装体积,存放于-80度。每次取一管放于细胞室-20度,用完之后再另外取用。
4. 细胞培养实验所用试剂尽量做到专人专用,标注清楚物品名称、个人名字和启封日期,以免交叉污染。若为同一课题组成员,试剂可相互协调共用,以保证试剂最大限度的使用完之后再订购。
 
六、值日生工作职责
1.每周值日生时间从周六开始,至下周五结束。
2.值日周开始时需完成的事情:在周末消毒灭菌并烘干枪头、离心管等常规物品,供未来一周的使用。各种规格的枪头需要准备两套,一套放置于烘箱中,一套放置于超净工作台中。配制消毒用的75%的酒精,制作酒精棉球,给细胞房内添加足够的95%乙醇供酒精灯使用。
3.值日周结束前需完成的事情:星期五或前后一天内打扫细胞房。包括超净台面、桌面、地面,给水浴锅加水或换水(超纯水或蒸馏水),洗细胞房专用的实验服,紫外消毒细胞房。切记给培养箱换超纯水,保证水质清洁!
注:若上周值日生及时给培养箱内水槽加足水,根据经验未来一周内培养箱不会干水,但值日生仍应经常检查,以便及时发现异常情况。
4.值日完成后需在平台QQ群发照片汇报已做值日
5.每4周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内;将培养箱内的不锈钢板取出,包括4块横板和左右2块立着的架子,用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命;用紫外灯照射培养箱内部15min。
 
 
如不遵守该细胞培养室守则,将取消进行细胞培养的资格!
细胞培养室工作守则